生物制剂生产过程中的残留宿主细胞蛋白（HCP）杂质可触发患者的免疫原性反应，降低药物疗效生物药物的生产需要遵从法规要求将HCP清除到可接受的低水平，以确保安全。

日本、欧洲和美国的药典已经发布了用于生物制药产品制造的HCP分析的开发和验证指南。为了满足合规性，必须系统地开发HCP分析，并对所有分析成分进行严格鉴定。

对于抗体验证，会使用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE）来进行HCP抗体覆盖率的检测。除此之外还需要使用凝胶电泳方法（包括2D-PAGE）对用作多克隆抗体生产校准标准或免疫原的抗原进行表征。虽然2D电泳是一种强大的分析技术，但传统的方法过程繁琐，需要多个手动程序来加载样本、凝胶平衡和转移。默克全新发布了Auto2D®全自动二维凝胶电泳系统，在一台机器内全自动完成两次电泳过程，用于HCP分析的开发和验证。Auto2D®二维电泳设备无需复杂培训，便于在生物工艺流程中实施，以符合行业标准。

Auto2D®系统二维凝胶电泳将完全自动化。使用者只需将样品送入第一维凝胶，通过蛋白质的等电点进行第一次蛋白质分离。平衡后，将第一维凝胶置于水平SDS-PAGE凝胶上，该凝胶按分子量分离蛋白质。Auto2D®二维电泳设备使用简单用户友好，消除繁琐的处理步骤。可在1-2小时内实现二次电泳，速度更快、完全自动化结果重现性更高，

•易于使用，无需高级培训

•快速实施的工作流程，减少实验室停机时间

•1-2小时内快速取得成果

•更好的再现性

•减少操作员之间的差异

•提供IQ/OQ服务

ELISA和其他免疫分析方法中的抗HCP抗体验证

ELISA是HCP分析最常见的方法。这种免疫分析方法依赖于多克隆抗体，这些抗体可以识别覆盖范围广泛的残留HCP。日本和欧洲药典规定需要使用2D凝胶电泳和Western blot分析（2D Western blotting）评估HCP抗体覆盖率。美国药典规定使用2D Western blotting或免疫亲和纯化，然后使用凝胶电泳来评估抗体覆盖率。

使用Auto2D®系统验证抗HCP抗体

使用pH值3-10的IEF芯片和12.5%（A）的PAGE芯片，在Auto2D®系统上通过2D凝胶电泳分离20μg商业来源的Cy3标记CHO HCP抗原。然后将蛋白质转移到膜上，并使用两种不同的抗HCP抗体（B，C）进行蛋白质印迹分析。数据表明，与抗HCP抗体2相比，抗HCP抗体1对宿主细胞蛋白质的覆盖范围更广。

Auto2D®系统的高再现性

通过2D凝胶电泳分离商业来源的0.75μg Cy5标记的CHO HCP抗原，并在Auto2D®系统上使用pH值为3-10NL的IEF芯片和12.5%的PAGE芯片进行分析。同一样品共测量三次（a-C）。白点（D）显示结果重叠。数据表明，Auto2D®系统的二维凝胶电泳结果具有很高的重复性。

在生物制剂生产和质量控制中，一致的、可重复的过程至关重要。除了更快的结果和更高的吞吐量外，全自动Auto2D®凝胶电泳系统消除了2D-PAGE和2D-DIGE方法中的日常和操作员之间的差异，默克Sigma-Aldrich® 为更可靠的结果提供了显著更好的再现性。

抗原分析

HCP抗原免疫需要获得用于ELISA和其他免疫分析的多克隆抗体库。HCP抗原也可用作检测和定量的校准标准。使用未转染的空细胞培养物生成过程特异性HCP抗原。必须对这些抗原进行表征，以显示HCP的模式，确认存在广泛的蛋白质，并证明来自空培养物的HCP抗原代表生产培养物中的HCP抗原。日本、欧洲和美国药典建议使用SDS-PAGE或2D凝胶电泳进行抗原表征和分析。美国药典还建议使用2D凝胶电泳作为残留HCP监测的补充方法。

使用Auto2D®系统（A-B），通过二维差异凝胶电泳（2D-DIGE）分离和分析Cy3标记的未纯化CHO HCP抗原和Cy5标记的蛋白A纯化CHO HCP抗原的混合物。合并数据（C）中的红点代表宿主细胞蛋白质，即使在蛋白质A纯化后，这些蛋白质也会保留下来。这些数据表明，Auto2D®系统可用于分析纯化后剩余的宿主细胞蛋白质组分。

Auto2D®系统可帮助您满足生物制药生产中HCP分析的监管要求。该全自动系统消除了日常和操作员之间的可变性，在不到2小时的时间内获得可靠的结果。Auto2D®系统易于在生物工艺流程中实施，减少了与生产变更相关的实验室停机时间。请赶快联系您身边的MERCK专家进一步了解这个产品吧