原位细胞死亡检测试剂盒，TMR red方案

货号12156792910

操作方案

组织切片固定

罗氏建议使用交联固定剂，例如TUNEL测定所用的多聚甲醛（即，使用我们的原位细胞死亡检测试剂盒时），避免在测定过程中将凋亡细胞的 DNA 碎片从细胞中洗出（可能导致假阴性）。在文献中，也有记载TUNEL使用丙酮或甲醇基固定剂——这类固定剂不会交联细胞成分。 使用此类固定剂时，由于DNA片段损失，可能会低估细胞凋亡情况。 使用不含福尔马林的 Accustain^®固定培养细胞效果与现配的多聚甲醛一样好，但速度更快（固定时间仅为 15 分钟，而多聚甲醛固定时间为 60 分钟）。也可尝试用 2% 戊二醛的固定。

4%多聚甲醛（PFA）制备

在螺旋盖瓶中，混合2 g PFA、40 mL PBS 和 100 μL 5N NaOH。+56℃水浴孵育； 不时摇动直至 PFA 完全溶解。 使用 5N HCl（约 100 μL）将 pH 值调至7.4，并用PBS填充至50 mL终体积。现配该溶液；现配现用，未用部分按照当地危险废物处理规定丢弃。

使用塑料包埋组织切片

塑料包埋组织切片不适用于此试剂盒。 组织包埋所用塑料（例如甲基丙烯酸甲酯、羟基甲基丙烯酸甲酯或环氧树脂，如 Araldite 和 Epon）通常由紫外线引起聚合。 由于紫外线也会诱导 DNA 链断裂（末端转移酶可以标记这类断裂），从而导致假阳性结果。 因此，在使用TUNEL方法（即使用罗氏的原位细胞死亡检测试剂盒）分析的样品中，罗氏不建议使用诱导 DNA 链断裂的嵌入方法。