细胞培养中的支原体检测和清除

• 看不见的污染威胁，细胞株和培养物的隐形敌人
• 支原体污染的常见来源及其控制方法
• 支原体检测方法
• 支原体清除方法
• 产品列表

看不见的污染威胁，细胞株和培养物的隐形敌人

维持无污染的细胞培养物是细胞研究的基础条件。其中支原体污染是真核细胞和干细胞培养中最普遍的问题之一。支原体是一种细菌，其成员通常为亚微米大小，缺乏细胞壁，难以或无法通过显微镜检查，同时也能拮抗绝大多数的抗生素。

尽管支原体通常不会引起细胞死亡，但它们可对培养的细胞造成多种影响，包括代谢改变、增殖减慢和染色体畸变。这些变化可能不会被立刻发现，但它们最终会影响培养数据的可靠性。污染细胞受损程度会严重到完全好似另一种细胞株。

简而言之，支原体污染降低了相关细胞系的有效性，无法为生命科学研究提供有意义的数据。

实验室中支原体污染的常见来源及其控制方法

实验室支原体污染的来源很难控制。由于人体皮肤上存在某些支原体，无菌技术操作不当即会引入培养物中。

另外，支原体还可通过受污染的添加剂（如胎牛血清），或随其他受污染细胞培养物传播而引入。这种交叉污染是实验室中极其常见的支原体污染引入途径。由于支原体菌株格外细小(0.2-0.8 µm)，常常会逃逸标准无菌培养基过滤方法的清除，还会迅速扩散，通过处理过程中产生的气溶胶和微粒污染实验室其他区域。

严格遵守良好实验室规范（例如良好的无菌技术）是关键，强烈建议对支原体进行常规培养检测，以成功控制支原体污染。有关其他污染来源和预防方法的详情请参阅细胞污染问题排查。

用于实验室设备和表面去污的喷剂和湿巾可提供额外的抗污染防护，并提高PCR检测结果的准确性。

支原体检测方法

以下产品是用于检测支原体污染的全套工具。研究人员会期望能多用一种检测方法来确认支原体污染的阳性结果。不同方法的检测试剂盒也能保证一定的检测频率，使重要培养物能得到充分保护。三种有效的检测方法为：

• 支原体培养法：取培养物样品接种到适宜支原体生长的微生物培养基/琼脂平板上。这是最直接的支原体污染检测方法，但需要的时间也最长。开始检测前培养物需要先培养至少两周时间，而获得支原体培养物的结果更可长达一个月之久。
• DNA染色法：方法简单，即先用Hoechst或DAPI染料染色细菌细胞核，再用荧光显微镜显色观察。这种方法虽然快速，但并不能得出完全肯定的支原体污染结果。
• PCR法（聚合酶链反应）：如果培养样品中存在支原体，此法可扩增其DNA。PCR法支原体检测已经成为日常细胞培养维护的可靠方法，是支原体检测服务公司采用的方法，也是细胞样本库保护细胞的方法。切记要精心设计PCR引物防止假阳性结果，并且确保未受污染的宝贵培养物不被破坏。这种检测法也可快速完成，以便应对可能的突发事件。

PCR法检测极其灵敏，并能快速提供结果，让研究人员能够快速发现并去除支原体污染。LookOut^®支原体PCR检测试剂盒具有优异的灵敏度，检测限低至每μL样品2个基因组。我们最新研发的一步法PCR试剂盒将移液步骤减到最少，因为提供的PCR混合液包含反应所需的全部试剂：引物、核苷酸、聚合酶和扩增内参。该混合液为即用型冻干品。参见我们的PCR法支原体检测优化。

DNA污染会干扰PCR法支原体检测结果，因此去除PCR环境中的DNA污染确保PCR试验的准确性至关重要。DNA去除喷雾(L8917)和湿巾(L9060-50)可去除PCR环境中的核酸污染物，保证更准确的PCR结果。

支原体清除方法

检测到支原体后，细胞培养人员可以选择清除培养物中的污染，或者从头来过。由于细胞株对于项目意义重大或较为昂贵，科研人员通常倾向于清除污染。

我们的支原体去除试剂盒是去除细胞培养支原体污染的便捷、有效选择。

用于检测、预防和去除支原体污染的产品清单