良好的细胞库操作实践

所有这些潜在的风险因素可以通过细胞库系统的实施来尽量降低。这种类型的系统称为分层库存系统或主细胞库系统。在最初进入实验室时，应将新的细胞培养物视为潜在的污染源，例如窝藏细菌、真菌和支原体，并应在检疫条件下进行处理，直至证明此类微生物污染物为阴性)。

分级细胞库系统

获得新的细胞系时，在制备主细胞库之前，应取出 3-5 个作为标记物冷冻。对其中一个安瓿进行支原体测试——如果测试失败，则放弃细胞建库程序。如果细胞通过支原体测试，则解冻其中一个安瓿并培养扩增，根据预期的使用水平获得 0-20 安瓿的主细胞库。每次从主库中解冻安瓿时，应对细胞进行质检测试。这些测试包括细胞计数和活率、支原体和其他微生物质检测试以及细胞系认证。如果细胞未通过测试，则需要重复建库程序。如果细胞通过测试，则可解冻细胞并培养扩增。这些细胞可用于冻存建库，应包括 20-200 个安瓿。这些安瓿可用于培养和实验用途，但在使用前应再次进行质检测试。

应从该主细胞库分配2-3个安瓿用于质检，以确认该库的细胞计数和活率是可接受的，并且该库不含细菌、真菌和支原体。在此阶段，通过STR分析、DNA条形码或SNP分析鉴定主细胞库也十分重要。还需要其他测试，例如病毒筛查。一旦这些测试顺利完成，应该解冻并培养一个来自主细胞库的安瓿以产生一个工作细胞库。这个库的规模将再次取决于所设想的需求水平。在使用培养物进行常规实验或生产之前，还需要进行质量控制测试（细胞计数、活力、验证以及不存在微生物污染物）。

重要说明：通过STR分析、DNA条形码或SNP分析鉴定主细胞库和工作细胞库。

该库系统的实施确保：

• 材料质量始终如一
• 使用相同传代数范围的培养物进行实验
• 需要时细胞只出于培养状态
• 原始细胞系特征得以保留

注意

1. 准备用于主细胞库和工作细胞库的安瓿数量取决于对其使用的预测需求。
2. 取样用于质量控制的安瓿数量取决于库的规模。最好在使用前对 5% 的库进行测试。
3. 工作细胞库中的安瓿应按顺序使用，使培养细胞保持不超过预定数量的细胞倍增。这个数目在具有有限寿命的细胞系（例如二倍体细胞系）中是最少的。
4. 工作细胞库应从主细胞库的安瓿中补充。完成该操作的时间应该足够，以便实现质量控制。
5. 在原始主储存器数量降至 5 安瓿以下之前，应准备新的主细胞库。
6. 进行的质量控制测试小组组成取决于预期用途，例如监管部门可能需要额外的测试，如病毒筛选和核型研究。