- 从新划线的平板上挑取单个菌落，并接种至3到5mL培养基中以获得起始培养物。
- 使用适当的抗生素，在37°C*下以250-300rpm摇瓶培养约8小时。
- 将起始培养物接种于过夜培养物中。用适当体积的培养基在大的培养瓶中以1：500至1：1000的比例稀释起始培养物，并在37℃*下以250-300rpm摇瓶孵育12至16小时。
*该温度适用于标准的大肠杆菌。一些细菌需要不同的培养温度。
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