StableCell™胰蛋白酶溶液

是什么使StableCell™胰蛋白酶与众不同？

胰蛋白酶是由胰腺分泌的胰蛋白酶原形式的蛋白水解酶，其被活化以帮助近端小肠中的食物蛋白降解。在生命科学实验室中，胰蛋白酶通常用于从培养板、培养瓶等中分离粘附细胞。传统胰蛋白酶溶液必须在-20°C冷冻保存，以防止自身消化，该过程可能导致酶活性降低（图1），从而无法实现细胞脱离。StableCell™胰蛋白酶溶液专门设计用于执行标准胰蛋白酶溶液所做的细胞解离，但不同的是前者无需等分、冷冻和解冻。使用该产品省却了细胞传代或实验之前耗时的等分、等待胰蛋白酶解冻等步骤，因此节省了大量时间，除此之外还省出了冰箱里的空间。我们的StableCell™胰蛋白酶溶液建议储存在2-8℃下，但是我们的研究以很高的置信度表明，StableCell™胰蛋白酶溶液即使储存在37℃下，也能保持 > 90％的活性和性能。

StableCell™胰蛋白酶已经用多种细胞系进行了验证。我们的研究包括SKOV-3、DU145、HEK293、16HBE41o-、HL-1和MDCK细胞系。我们将StableCell™胰蛋白酶的分离作用和酶活性与我们的标准胰蛋白酶溶液进行了比较，发现对于我们所观察每种细胞系，它们都具有相似的性能。然而，StableCell™胰蛋白酶独特的配方使其能够在2-8℃下保持其酶活性，而我们的标准胰蛋白酶溶液如果不处于冷冻状态会迅速降解。有关详细信息请参见 图1 和 图2 （紫色表示StableCell™，蓝色表示标准胰蛋白酶）。

我们的研究最终表明，与标准胰蛋白酶溶液相比，StableCell™胰蛋白酶溶液表现出相同的细胞分离性能。(图2)。

注意：

• SK-OV3细胞，以约90％汇合度接种于6孔板中
• 细胞分离和细胞活力在三种不同浓度（1x，5x，10x）的标准或StableCell™胰蛋白酶溶液下进行了测定。
• 所有溶液均使用HBSS稀释至1倍当量
• 阴性对照：稀释于HBSS的稳定剂处理和未经处理的细胞（t = 0）
• 实验设置三次重复，在37°C下孵育10分钟

“还有其他细胞分离溶液也可以保存在2-8C甚至室温。很高兴不必等待解冻，但我最喜欢StableCell™的是它实际上是胰蛋白酶，所以我确切地知道我的细胞是用什么处理的。”

操作流程

StableCell™胰蛋白酶溶液可用于从培养表面移除粘附细胞，以进行传代、冷冻保存或实验。从培养基底物除去细胞的最常用方法是用胰蛋白酶或胰蛋白酶-EDTA溶液处理。StableCell™胰蛋白酶溶液的浓度范围为0.05％到0.5％。选择浓度范围的原因如下：

1. 胰蛋白酶活性或效力的差异
2. 孵育时间不同
3. 不同的细胞系。

胰蛋白酶浓度过高或超过所需时间的细胞孵育会损坏细胞膜，从而导致细胞损伤和死亡。如果不确定要使用的胰蛋白酶浓度，请从最低预期有效浓度开始，仅在细胞无法分离时才进行增加。解离时间在批次间的差异可能会发生，这也是可以预料到的，因为每个批次的酶活性都会有所不同。如果需要将胰蛋白酶从浓缩溶液中进行溶解或稀释，则使用不含Ca²⁺ 或Mg²⁺的缓冲盐溶液非常重要，例如改良的Hank平衡盐溶液（货号H9394）。将胰蛋白酶溶液的pH调节至7.4-7.6。

1. 抽吸除去培养皿中的培养基，并用不含Ca⁺² 和Mg⁺² 的盐溶液洗涤细胞单层，以去除所有血清残留。吸除盐溶液。
2. 将足够的StableCell™胰蛋白酶溶液分配到培养容器中，完全覆盖细胞单层，然后置于37°C培养箱中孵育约2分钟。
3. 吸除StableCell™胰蛋白酶溶液，并将封闭的培养容器放回培养箱。孵育细胞层，直至细胞从表面脱离。可以用倒置显微镜观察进展情况。

注意：从培养表面除去细胞所需的时间取决于细胞类型、种群密度、生长培养基中的血清浓度、胰蛋白酶的效力、以及自上次传代培养以来的时间。胰蛋白酶可能会导致细胞损伤，因此应尽可能降低接触。

1. 当胰蛋白酶消化过程完成时细胞将处于悬浮状态并呈圆形。
2. 建议尽快将血清或含有血清的培养基加入细胞悬液中，以抑制可能损害细胞的胰蛋白酶进一步活动。也可以以等摩尔浓度添加大豆胰蛋白酶抑制剂（货号T6414），以抑制存在的胰蛋白酶。当在无血清条件下培养时，使用黄豆胰蛋白酶抑制剂。
3. 用移液管轻轻吸排细胞悬液，以使团块散开，将细胞重悬。如果需要，可以进行进一步稀释，用于细胞计数和/或传代培养。

常见问题