二抗

蛋白A、G和L

蛋白A源自金黄色葡萄球菌。蛋白G源自某种链球菌。两者均具有与哺乳动物IgG的Fc片段结合的位点。这些蛋白对IgG的亲和力因动物物种而异。蛋白G对大鼠、山羊、绵羊和牛的IgG，以及小鼠IgG1和人IgG3具有较高的亲和力。 蛋白A对猫和豚鼠IgG的亲和力更高（表1）。除了IgG Fc结合位点外，天然蛋白G还含有白蛋白结合位点、免疫球蛋白的Fab片段结合位点以及膜结合区域，这可能会导致非特异性染色。通过构建该蛋白的重组形式，已解决了这些问题。 重组蛋白G经过工程改造，去除了白蛋白结合区；而重组蛋白G′是一种截短蛋白，它既不含白蛋白、Fab和膜结合位点，又保留了Fc结合位点，因此比天然形式对IgG具有更高的特异性。

源自巨链球菌（Peptostreptococcus magnus）的蛋白L对多种物种的kappa轻链具有亲和力（表2）。它可检测单克隆或多克隆IgG、IgA和IgM，以及含有kappa轻链的Fab、F(ab′)2和重组单链Fv（scFv）片段。它还能与鸡IgG结合。 注：牛、山羊、绵羊和马等物种的免疫球蛋白几乎完全由λ链组成，因此这些物种的免疫球蛋白与蛋白L的结合效果较差，甚至完全无法结合。

检测试剂

蛋白A和蛋白G作为通用、非物种特异性试剂，用于结合哺乳动物组织中的初级抗体或表面IgG。 建议在包括小鼠和大鼠在内的大多数物种中使用蛋白G；建议在猫和豚鼠中使用蛋白A。这两种蛋白均不建议用于检测IgA或IgM、Fab片段或禽类IgG。当与琼脂糖等树脂结合时，蛋白A和蛋白G可用于从血清或腹水中亲和纯化免疫球蛋白。

蛋白L作为通用试剂，用于结合哺乳动物或禽类的初级抗体，或所有类别的表面Ig。它特别适用于检测Fab、F(ab′)₂片段和重组scFv片段，检测结合于Fc受体的Ig，或在存在牛Ig的情况下检测单克隆抗体。其使用仅限于检测携带kappa轻链的Ig。

树脂

蛋白A和蛋白G具有与哺乳动物IgG的Fc片段结合的位点。这些蛋白质对IgG的结合能力因物种而异。一般而言，IgG对蛋白G的亲和力高于对蛋白A的亲和力，且蛋白G能结合更多物种的IgG。 各种IgG亚类（尤其是小鼠和人类来源的）对蛋白A的亲和力差异比对蛋白G的更大。因此，蛋白A可用于从某些物种中制备同型纯IgG。蛋白L适用于从细胞培养上清液中分离小鼠单克隆抗体，且不会受到牛IgG的污染。