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一般描述
pZerve 是一种不含二甲基亚砜 (DMSO)、胎牛血清或其他动物蛋白的冷冻保存液。通过消除这些有害成分，达到最佳恢复率。pZerve 即用型，不需要任何稀释或进一步处理，可用于无血清培养基或含血清培养基培养的细胞。
应用
pZerve 已成功用于以下细胞类型，包括但不限于：
- 肥大细胞
- 树突细胞
- 间充质细胞
- LNCaP – 人转移性前列腺腺癌
- LS 180– 人结肠，腺癌
- 293– 人转化的原代胚胎肾
制备说明
推荐的冻融方案
冷冻 ：
1. 检查培养物是否健康生长、融合等。而且没有污染。
2. 如果冻存贴壁细胞，37°C 下用 0.25% 胰蛋白酶去除 1 ~ 3 分钟。
注：在无血清培养基中生长的一些细胞系可能对 0.25% 胰蛋白酶敏感，因此可能需要较少的胰蛋白酶或添加胰蛋白酶抑制剂。用胰蛋白酶孵育后清洗细胞。
3. 进行细胞计数，测定活细胞总数。细胞存活率应大于 80%，细胞应处于对数生长期晚期或融合前生长期。
4. 600～800 rpm 离心细胞 10 分钟。去除上清液，保存 3-5 mL 用于无菌检查（例如硫乙醇酸盐、脑心浸液等）和支原体检查。
5. 将细胞轻轻重悬在适当体积的 pZerve 中，浓度为每毫升 1 x 10 6 -1 x 10 7 个细胞。一些细胞类型如杂交瘤和骨髓瘤可能需要增加细胞密度。
6. 将细胞悬液分装于塑料或玻璃安瓿中，每份 1-2 mL。
7. 密封安瓿，室温保存 30 分钟，时不时轻轻搅拌，使细胞完全暴露于冷冻保存液中。
8. 将安瓿置于保温容器中，-20℃ 冰箱保存一小时。除去绝缘层，转移至-70℃ 冰箱中 1 小时。不得在-70℃ 下储存超过两小时。将小瓶转移至气相液氮中，并储存 24 小时，然后转移至液相中。建议大多数细胞类型的最佳冷却速率为每分钟 1°C。
恢复：
1. 从冰柜中取出小瓶，37℃ 水浴中迅速解冻。
2. 用 70% 乙醇擦拭药瓶。
3. 将细胞转移到培养瓶中，缓慢加入适当体积的生长培养基 (2～5 mL)。
4. 37°C 下回收至少 2 小时后，应进行准确的活力计数（即台盼蓝染料排斥）。
5、24 小时内应更换培养基。
如果需要，可通过以下方式清洗去除 pZerve：
1. 将细胞转移至 15 mL 离心管中，缓慢加入 2～3 mL 完全生长培养基（解冻后细胞较脆弱）。
2. 400 ~ 600 rpm 离心约 5 分钟。
3. 倾去细胞，转移至装有适当体积生长培养基的培养瓶中。
4. 细胞活性计数应在恢复后至少两小时进行。
重要提示： 在终止培养之前，建议您检测整个冻融循环，以确保培养物的无菌性和长期储存前的细胞活力。
冷冻 ：
1. 检查培养物是否健康生长、融合等。而且没有污染。
2. 如果冻存贴壁细胞，37°C 下用 0.25% 胰蛋白酶去除 1 ~ 3 分钟。
注：在无血清培养基中生长的一些细胞系可能对 0.25% 胰蛋白酶敏感，因此可能需要较少的胰蛋白酶或添加胰蛋白酶抑制剂。用胰蛋白酶孵育后清洗细胞。
3. 进行细胞计数，测定活细胞总数。细胞存活率应大于 80%，细胞应处于对数生长期晚期或融合前生长期。
4. 600～800 rpm 离心细胞 10 分钟。去除上清液，保存 3-5 mL 用于无菌检查（例如硫乙醇酸盐、脑心浸液等）和支原体检查。
5. 将细胞轻轻重悬在适当体积的 pZerve 中，浓度为每毫升 1 x 10 6 -1 x 10 7 个细胞。一些细胞类型如杂交瘤和骨髓瘤可能需要增加细胞密度。
6. 将细胞悬液分装于塑料或玻璃安瓿中，每份 1-2 mL。
7. 密封安瓿，室温保存 30 分钟，时不时轻轻搅拌，使细胞完全暴露于冷冻保存液中。
8. 将安瓿置于保温容器中，-20℃ 冰箱保存一小时。除去绝缘层，转移至-70℃ 冰箱中 1 小时。不得在-70℃ 下储存超过两小时。将小瓶转移至气相液氮中，并储存 24 小时，然后转移至液相中。建议大多数细胞类型的最佳冷却速率为每分钟 1°C。
恢复：
1. 从冰柜中取出小瓶，37℃ 水浴中迅速解冻。
2. 用 70% 乙醇擦拭药瓶。
3. 将细胞转移到培养瓶中，缓慢加入适当体积的生长培养基 (2～5 mL)。
4. 37°C 下回收至少 2 小时后，应进行准确的活力计数（即台盼蓝染料排斥）。
5、24 小时内应更换培养基。
如果需要，可通过以下方式清洗去除 pZerve：
1. 将细胞转移至 15 mL 离心管中，缓慢加入 2～3 mL 完全生长培养基（解冻后细胞较脆弱）。
2. 400 ~ 600 rpm 离心约 5 分钟。
3. 倾去细胞，转移至装有适当体积生长培养基的培养瓶中。
4. 细胞活性计数应在恢复后至少两小时进行。
重要提示： 在终止培养之前，建议您检测整个冻融循环，以确保培养物的无菌性和长期储存前的细胞活力。
其他说明
- pZerve 仅含有人体蛋白。
- pZerve 准备就绪，无需任何稀释或进一步处理。
- 无菌膜过滤 pZerve。
- 临用前混匀。
- 请勿稀释。
法律信息
pZerve is a trademark of Protide Pharmaceuticals, Inc.
WGK
WGK 3
闪点(°F)
Not applicable
闪点(°C)
Not applicable
法规信息
监管及禁止进口产品
Arnold S Kirshenbaum et al.
Leukemia research, 27(8), 677-682 (2003-06-13)
Two novel stem cell factor (SCF) dependent human mast cell lines, designated LAD 1 and 2, were established from bone marrow aspirates from a patient with mast cell sarcoma/leukemia. LAD 1 and 2 cells have the ultrastructural features of human
Madeleine Rådinger et al.
Current protocols in immunology, Chapter 7, Unit 7-Unit 7 (2010-09-04)
Antigen-mediated mast cell activation is a pivotal step in the initiation of allergic disorders including anaphylaxis and atopy. To date, studies aimed at investigating the mechanisms regulating these responses, and studies designed to identify potential ways to prevent them, have
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