细胞增殖试剂盒II（XTT）

细胞增殖试剂盒II(XTT)是一种比色法测定细胞增殖、活性和细胞毒性的非放射性定量方法。样品材料是在96孔微孔板中的贴壁或悬浮细胞。

比色法通过在培养基中加入四唑啉盐的裂解来分析活细胞的数量。该技术既不需要清洗细胞，也不需要收集细胞，并且在同一个微板上完成从微培养到ELISA读板仪的完整数据分析。
最近，四唑盐XTT被发现。不同于MTT，XTT的切割产品在水中是可溶的；因此，不再需要一个增溶的步骤。四唑盐XTT由一种复杂的细胞机制被切割成甲臜。这种生物性还原仅会发生在活细胞内，并通过糖酵解与NAD(P)H的产生相关。因此，所形成的甲臜染料的量与培养体系内具备代谢活性的细胞数量直接相关。

细胞增殖试剂盒II（XTT）用于以96孔板的形式对细胞群中细胞的增殖和活力进行非放射性的光谱定量。它可用于：

• 测量对生长因子、细胞因子、分裂素和营养素而作出响应的细胞增殖。
• 细胞毒性和细胞抑制化合物，如抗癌药物和其他药物化合物的分析。
• 生长抑制性抗体和生理性调节因子的评估。
• 在骨组织工程中用于骨细胞生长的多种支架的生物兼容性检测。
• 细胞活力检测。

1个试剂盒包含2种组分。

检测是基于在电子偶联试剂存在的情况下对四唑盐XTT进行切割并生成可溶性的甲臜盐。这种转化仅会发生在活细胞中。生长于96孔组织培养板中的细胞与XTT溶液一同孵育2-20小时。在此孵育期之后，采用扫描多孔分光光度计(ELISA读板仪)对产生的甲瓒染料进行定量。所测量的吸光值与活细胞的数量直接相关。
细胞增殖及活力检测是细胞生物学中具有特别重要性的常规应用。四唑盐（如MTT, XTT, WST-1）对于该类型分析特别有用。四唑盐被琥珀酸-四唑蓝还原酶系统（EC 1.3.99.1）切除成甲臜，而该系统属于线粒体的呼吸链并仅在代谢性完整的细胞中具有活性。

工作溶液：溶液的制备
将XTT标记试剂和电子偶联试剂分别在37 °C的水浴中进行解冻。将每支管子进行充分混匀以获得清亮的溶液。
XTT标记混合物
如需在一个微孔板（96孔板）中进行细胞增殖检测（XTT），将5 ml XTT标记试剂与0.1 ml电子偶联试剂相混合。
注意：为了获得可靠的结果，将XX标记试剂盒电子偶联试剂仅在立即要使用之前进行解冻和混合。
工作指南
细胞在湿润的环境下按照细胞的培养基需要(如 37 °C, 6.5% CO₂)，生长于每孔100 μl 终体积培养基的微孔板（组织培养级，96孔，平底）中。
细胞培养的孵育时间取决于用于检测的特定实验方法以及细胞系。对于绝大多数实验设置，24至96小时的细胞孵育时间是较为合适的。
在孵育阶段之后，将按上述方法（XTT终浓度0.3 mg/ml）制备的50 μl XTT标记混合物加入至每孔中。
在湿润的环境下将微孔板孵育4至24小时（如37 °C，6.5% CO₂）。
注意：孵育时间随着独立的实验设置而变化（如所使用的细胞类型及细胞浓度）。因此，我们推荐按描述的方法在加入XXT标记混合物之后的不同时间点通过使用同一个微孔板对吸光值进行测量（如4,6,8,12及18小时），以确定特定实验设置的最佳孵育时间。
储存条件（工作溶液）：仅在立即使用之前将试剂解冻。推荐制备适当的分装液[5 ml XTT标记试剂以及0.1 ml电子偶联试剂对于用单一微孔板（96孔）检测的性能要求是必要的]
注意：避免反复冻融。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。