抗I型胶原抗体，克隆5D8-G9

胶原在整个进化过程中是高度保守的，其特征在于不间断的“甘氨酸X Y”三联体重序列，其是三螺旋结构的必需部分。I型胶原（95kDa）存在于骨骼，角膜，皮肤和肌腱中。编码基因的突变与成骨不全症，埃勒斯·当洛斯综合征和特发性骨质疏松症有关。该基因和血小板衍生的生长因子β基因所在的染色体17和22之间的相互易位与称为隆突性皮肤纤维肉瘤的特定类型的皮肤肿瘤有关，这是由于生长因子的表达不受调节所致。

I型胶原抗体是一种单克隆IgG1抗体，可结合I型胶原C端附近的表位。

I型胶原抗体显示对人、牛和绵羊I型胶原具有高亲和力。 没有证据表明与III型，V型和VI型胶原或结缔组织蛋白有交叉反应。抗体仅与天然非变性胶原I反应

ELISA：检测天然I型胶原。捕获：2-4 μg/mL；检测：10μg/ml I型胶原抗体稀释液将检测50ng人I型胶原与其他胶原是否无反应性。 可能需要更高水平的抗体来检测更低浓度的胶原。注意抗体不会与其自身配对。

免疫组化：不固定的冷冻切片。

使用冷冻切片机从冷冻样品上切下6 μm厚的切片。彻底风干。 用PBS再水化。 IF研究通常不需要阻断，如果使用DAB，建议对过氧化物酶进行预处理，阻断PBS溶液中的2%BSA将降低背景。

用PBS缓冲液稀释I型胶原抗体，将其添加至样品并培养60分钟。（1:100-1:500）。

在PBS中洗涤切片10分钟，两次。 加入FITC偶联抗小鼠抗体，培养60分钟。

在PBS中洗涤10分钟，两次。

将切片安装在含有1 mM 1，4-苯二胺的甘油/水（9：1 v/v）中。（FITC稳定性或使用Chemicon目录号5096或5013。

注：

初步研究表明，通过使用各种酶（例如0.1%胃蛋白酶的0.1 M HCl溶液，37°℃下5分钟）对切片进行预处理（在步骤2之前），可以增强某些组织的染色。

流式细胞术： 1：100

免疫印迹：1：1000，仅使用天然、非变性、非还原蛋白质印迹。 Ramshaw，et.al （1988）“天然胶原的电泳和电印迹。”Anal.Biochem.168:82-87. 抗体在传统的减少的蛋白质印迹中不起作用。

简而言之，必须准备PAGE凝胶以运行天然胶原蛋白。

在10mM乳酸钙、pH值6.8中，通过添加0.05-0.1%TEMED和0.05-.1%过硫酸铵（从10%贮备液中添加）使总含量为3%（w/v）的丙烯酰胺分离凝胶在垂直玻璃板上聚合，所述分离凝胶包含3.2%（w/w）双丙烯酰胺与单体作为交联剂的比例。 阴极缓冲液（负极）为50mM Tris用乳酸调至pH值6.6；阳极（正极）缓冲液是0.1 M乳酸pH值2.5{Friis，SJ et al，1985 J Biochem Biophys Methods 10：301-306.}。

在样品上样之前，将凝胶在100V下运行至少90分钟。将胶原样品以1mg/ml溶于0.1 M乳酸或含10%蔗糖的0.1 M乙酸中，每通道上样5-10μg。根据需要加入甲基绿以辅助上样。电泳为70V，室温下5小时。

印迹使用0.1 M乳酸pH值2.5，20V室温下16小时，胶原向阴极迁移。

研究子类别
ECM 蛋白

研究类别
细胞结构

经验证，该抗I型胶原抗体，克隆5D8-G9可用于ELISA、FC、WB、IH检测I型胶原。

在50 mM Tris醋酸盐，150 mM NaCl，0.1%Bronidox（pH值5.5）中浓度为1mg/ml的100μg纯化抗体。

免疫球蛋白级分已通过蛋白A色谱法纯化，考马斯PAGE显示纯度为>95%。提供经0.22微米过滤的I型胶原抗体。

形式：纯化

I型胶原抗体以液体形式在环境温度下运输。 当在2-8°C下储存时，该物料可稳定长达6个月。

警告：单克隆试剂溶液含有0.1%叠氮化钠作为防腐剂。由于该物料在管道中积聚会产生潜在危害，因此应将废试剂与大量水一起处置。

对照
人肾裂解物

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