质量控制
我们对于性能的保障能力与我们对寡核苷酸化学和合成平台、分析系统以及方法开发经验的全面了解直接相关。
图 1.质量控制贯穿使用于整个制造流程。
起始材料和化学
关键的原材料都从内部开始溯源，包括：亚磷酰胺、固相合成载体、试剂和溶剂。在收到关键原材料后，将执行进货质量控制，其中可能包括水含量分析（卡尔费休滴定法）、亚磷酰胺鉴定、固相载体验证和基于分析证书的验收。此外，严格的供应商资格认证计划也是我们质量管理体系的一部分，使得我们能够对供应商关系和绩效进行管理。
化学实验方案已经过优化，可确保在合成过程中每个核苷酸的添加都能达到>99.0%的偶联效率。实验方案经过精细的调整，可用于对短（<35 mer）和长（>110 mer）的寡核苷酸均进行合成。寡核苷酸合成是采用成熟的亚磷酰胺化学方法进行的。我们会定期对新的化学方法进行研究，包括保护基团、活化剂和合成载体，以不断提高寡核苷酸的质量和产品组合的扩展性。
仪器和合成
我们的内部工程团队包括机械、电气和软件专业人士，他们设计并验证了我们专有的合成和加工设备。仪器是通过既定的设计评审流程以及安装鉴定、操作鉴定和过程鉴定（IQ/OQ/PQ）程序而进行认证的。广泛的仪器预防和预后维护计划提供了最佳性能，从而确保一致性和可靠性。我们的LIMS可实时对每种寡核苷酸的进展进行持续性的监测，并将不合格的产品进行标记以隔离。
通过质谱验证序列的同一性
质谱（MS）是分析寡核苷酸时所选择的技术。它与合成过程认证一同确保了合成序列的正确性。此外，它还能对以下低水平的副产物进行灵敏的检测：
- 截断序列（因不完全的偶联而形成，即N-1、2等），有时也称为“shortmers”
- 删除序列（因合成过程中的加帽失败而成），也称为shortmers
- 脱嘌呤（腺嘌呤和鸟嘌呤从各自的[核糖]核苷上的意外水解切割）
- 保护基团的去除不完全，例如腺嘌呤上的苯甲酰
- 丙烯腈加合物（在脱保护过程中形成）
每种寡核苷酸都通过质谱进行了彻底的表征，以确保这些副产物均低于可接受的上限，因为即使合成了正确的序列，它们也会对性能产生负面影响。
两类质谱被用于确保我们100%质量控制的承诺：MALDI-TOF MS（基质辅助激光解吸/电离飞行时间）和ESI-MS（电喷雾电离）。每种都有相应的优缺点。我们不同的生产基地会根据主要合成序列的性质选用一种或两种类型的仪器。
通过分析型HPLC验证纯度
MALDI-TOF MS和ESI-MS可提供纯度的定性评估，而定量评估是通过RP-HPLC（反相高效液相色谱）、IE-HPLC（离子交换高效液相色谱）和UPLC（超高效液相色谱）进行的。所使用的方法取决于寡核苷酸的性质以及最终规格参数。
通过紫外光谱定量
每种寡核苷酸都在260 nm处读取了吸光值。为了准确起见，可使用配有光程校正功能的自动分光光度计进行多次测量。使用行业标准的“最邻近”法以及朗伯比尔定律计算得到的消光系数可将吸光值转换为相应的量。
siRNA双链体分析
所有的siRNA单体都是通过质谱分析的。此外，根据序列的性质，我们不同的生产基地可能会使用PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）来分析双链体。
定制形式
随着自动化持续成为许多实验室关注的焦点，以定制形式，如96孔板和384孔板交付寡核苷酸面临更多确保稳定质量的挑战。产品形式，如特定的板、浓度以及正向和反向引物的混合，都需要详细的规格参数。采取了额外的质量控制措施来验证定制形式的准确性。
最终检查
所有产品在包装前都会进行最终的目视检查。这些检查为最终的成品提供了最后一道保障，确保其形式正确、标签正确并可立即投入使用。
质量保证
我们制造流程秉承一套稳健的质量管理体系（QSM），满足以下认证标准：
- ISO 9001:2015关于制造研究级寡核苷酸的要求
- ISO 13485:2016关于制造诊断级寡核苷酸的要求
- ISO 14001:2015关于有效环境管理的要求
这种质量的文化已深入我们业务的方方面面。我们QMS的要素包括：
- 分析证书
- 文件控制
- 变更提醒
- 供应商管理
- 商业协议
- 纠正和预防措施
每个要素都在推动着质量保障和验证，我们也会定期进行严格的注册服务商、内部和客户审核。
结论
多种分析技术可用于对寡核苷酸进行质量控制，包括100％质谱分析。
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