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酵母转化简介

转化发展史和酵母转化

酵母生长迅速且细胞分散,因而成为各类研究的真核模型系统。它们具有明确的遗传系统和高度多样的DNA转化系统,可有效地进行蛋白质生产。

转化是将外源DNA引入细胞,引起遗传变异或基因修饰的过程。1928年,Griffith首次报道了利用肺炎链球菌进行的转化。1Avery等人于1944年证明了DNA转化的原理。21978年首次成功转化了真菌中出芽酵母酿酒酵母的原生质球。

1978年首次成功转化了真菌中出芽酵母酿酒酵母的原生质球。3大多数酵母品种,包括酿酒酵母,可以通过外源DNA在环境中转化。4酵母细胞用酶处理以降解其细胞壁,产生原生质球。这些细胞非常脆弱,但可高比率吸收外源DNA。5酵母重组DNA技术已经比较成熟,并且有许多不同的载体构建体可供使用。

细胞中的转化

酵母转化示意图

图 1.酵母转化示意图

现已开发出了多种酵母细胞转化方法(图1)。4, 5常用的酵母细胞转化方法包括锂、电穿孔、基因枪和玻璃珠方法。这些方法常用于酿酒酵母,但也可用于其他真菌转化,如酵母(例如粟酒裂殖酵母白色念珠菌毕赤酵母)和丝状真菌(例如曲霉属菌种)。

要求

转化方法涉及三个主要步骤:

  • 制备感受态酵母细胞
  • 用质粒DNA转化
  • 后续接种以筛选转化体。

审核所需材料和详细的转化实验方案。

应用

转化已在分子生物学领域广泛应用。酵母转化的常见用途如下:

  • 酵母转化体可进一步用于细胞裂解和质粒制备用途。
  • 从转化体获得的质粒DNA继续用作PCR模板,或用于转化大肠杆菌。
  • 酵母转化体用于酵母双杂交系统,以研究蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA的相互作用。
  • 酵母转化技术也可用于蛋白质和酶的商业化生产。
  • 此外,它们还可用于食品工业和工厂废物处理系统。
  • 酵母表达系统可合成和分泌人蛋白质(如白细胞介素-1β),在制药行业制剂方面可能蕴含着巨大的潜能。

转化效率计算

不同菌种的酵母具有不同的效率。6转化效率指的是转化反应中每μg超螺旋质粒DNA产生的转化体数量。7大多数转化实验方案适用于面包酵母、酿酒酵母,可能并不适用于其他菌种。

影响效率的因素

影响酵母转化效率的部分因素如下:

  • DNA分子量
  • 质粒
  • DNA形式
  • 细胞基因型
  • 细胞生长情况
  • 转化类型
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参考文献

1.
Hinnen A, Hicks JB, Fink GR. 1978. Transformation of yeast.. Proceedings of the National Academy of Sciences. 75(4):1929-1933. https://doi.org/10.1073/pnas.75.4.1929
2.
Griffith F. 1928. The Significance of Pneumococcal Types. J. Hyg.. 27(2):113-159. https://doi.org/10.1017/s0022172400031879
3.
Avery OT, MacLeod CM, McCarty M. 1995. Studies on the Chemical Nature of the Substance Inducing Transformation of Pneumococcal Types. Mol Med. 1(4):344-365. https://doi.org/10.1007/bf03401572
4.
Ito H, Fukuda Y, Murata K, Kimura A. 1983. Transformation of intact yeast cells treated with alkali cations.. 153(1):163-168. https://doi.org/10.1128/jb.153.1.163-168.1983
5.
Johnston S, Anziano P, Shark K, Sanford J, Butow R. 1988. Mitochondrial transformation in yeast by bombardment with microprojectiles. Science. 240(4858):1538-1541. https://doi.org/10.1126/science.2836954
6.
Dohmen RJ, Strasser AWM, Höner CB, Hollenberg CP. 1991. An efficient transformation procedure enabling long-term storage of competent cells of various yeast genera. Yeast. 7(7):691-692. https://doi.org/10.1002/yea.320070704
7.
HAYAMA Y, FUKUDA Y, KAWAI S, HASHIMOTO W, MURATA K. 2002. Extremely Simple, Rapid, and Highly Efficient Transformation Method for the Yeast Saccharomyces cerevisiae Using Glutathione and Early Log Phase Cells. J. BIOSCI. BIOENG.. 94(2):166-171. https://doi.org/10.1263/jbb.94.166
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