转染细胞准备
约转染前24小时接种细胞，确保细胞处于最佳密度（70–90%融合度）。
转染前步骤
- 待X-tremeGENE™ HP DNA转染试剂、DNA和稀释液（Opti:MEM®I减血清培养基或无血清培养基）回温至 +15°C 至 +25°C，并轻轻涡旋。
- 稀释液加入无菌试管中。
- 加入质粒DNA。轻轻地上下吹打混匀。
- 向稀释的DNA中加入X-tremeGENE™ HP DNA转染试剂。
- +15°C 至 +25°C 孵育 15 min。
- 逐滴向细胞中加入转染复合物。
- 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶，确保整个培养板上分布均匀。
- 在测量蛋白表达之前，将细胞孵育 18-72 小时。
X-tremeGENE™ DNA转染试剂成功转染技巧
- X-tremeGENE 9DNA 转染试剂保存在 +2~+8℃温度下，X-tremeGENE HP DNA 转染试剂保存于-15~-25℃温度下。
- 将盛有 X-tremeGENE DNA 转染试剂的小瓶置于 +15~+25°C温度下，涡旋 1 秒钟，然后取出所需量。
- 请勿将 X-tremeGENE DNA 转染试剂分装；将剩余的转染试剂储存在原始玻璃瓶中。
- 尽量减少未稀释的转染试剂与塑料表面的接触。
- 取出所需量后，使用后立即紧扣小瓶盖。
- X-tremeGENE DNA 转染试剂的最小用量：用于转染的 DNA 复合物是 100μl。较低体积的复合物形成过程显著降低转染效率。
- 请勿将聚苯乙烯制成的试管或微孔板用于 X-tremeGENE DNA 转染试剂：DNA 复合物制备。当不能避免使用聚苯乙烯材料时，一定要将转染试剂直接移液到无血清培养基中，或加入低血清培养基（不含任何血清）。
- 请勿使用含硅吸头或吸管。
- 确定转染时细胞仍在活跃生长。
- 通过加入含下列内容的微孔，在进行转染时加入适当的对照品：
(1) 未转染细胞
(2) 只带转染试剂的细胞
(3) 仅带 DNA 的细胞 - 转染试剂的最佳配比：DNA 和复合物的最佳总量可能随着细胞系、细胞密度、用于测定的细胞生长状态和基因表达的不同而变化。
材料
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