外植体灭菌 — 植物组织培养方案

植物材料表面灭菌是建立植物组织培养实验方案中的重要一步。以下是常用植物组织培养消毒剂和对绿色胶囊、干燥种子和兰花种子进行消毒的详细信息。

常用的植物组织培养消毒剂

*商业漂白剂含有约5％的次氯酸钠，因此可以以10-20％的浓度使用，其相当于0.5-1.0％的次氯酸钠。

可通过以下操作增强灭菌的效果：

• 在用另一种消毒剂溶液处理之前，将材料置于70％乙醇溶液中。已证明使用两步（双源）灭菌程序对某些物种有益。
• 可以在消毒剂中加入润湿剂，如TWEEN^®20或80（产品编号分别是P1379、P1754），以降低表面张力，使表面更好接触。
• 在真空下进行灭菌过程。这样可以去除气泡，并提供更有效的灭菌过程。

兰花种子灭菌

兰花种子非常小，几乎没有营养储备。单个果荚可含有1,500至3,000,000个种子。体外播种可使萌发未成熟的种子（绿荚）成为可能。在果荚裂开后，对绿色果荚灭菌比对单个种子灭菌更容易。 Lucke（1971）指出，当果荚达到约三分之二成熟度时，可以对兰花种子灭菌。下面列出了各种兰花品种果荚的估计正常成熟时间。

绿色果荚灭菌

1. 将果荚浸泡在100％漂白溶液中30分钟。
2. 将果荚蘸取95％酒精并点燃。
3. 在无菌条件下，打开果荚，刮出种子。
4. 小心地将种子铺在培养基表面上。

干种子灭菌

1. 收集种子并放入小烧瓶或瓶中，或置于缩短的移液管中，移液管的一端用棉花密封。将种子放入移液管后，用棉花密封移液管的另一端。
2. 制备含有5-10％市售漂白剂的溶液，其中含有几滴TWEEN^® 20。
3. 将漂白剂溶液加入烧瓶中，或将溶液吸入移液管。旋转含有种子和漂白剂的烧瓶，或者用移液管反复吸取和排出漂白剂溶液。
4. 将种子消毒5-10分钟。
5. 去除漂白剂溶液，用无菌组织培养级纯水冲洗种子。
6. 将种子转移到无菌培养基中。